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要想操作好超高效液相色譜離不開以下流程!

更新時間:2024-08-20      點擊次數(shù):1091
  超高效液相色譜作為一種先進(jìn)的分析技術(shù),具有高分辨率、高靈敏度和高效率的特點,在各個領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用。通過自動控制純?nèi)軇┗驖馊芤旱谋壤齺碓诰€配制所需要的流動相,極大地縮短了準(zhǔn)備實驗所需要的時間。它可讓您充分利用ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)四元混合能力的優(yōu)勢,同時還能管理所選流動相的理想pH和離子強度要求。
  超高效液相色譜操作流程的詳細(xì)介紹:
  1、樣品制備
  樣本轉(zhuǎn)換:將固體樣本轉(zhuǎn)換為液體形式,簡化復(fù)雜混合物,去除干擾基質(zhì),濃縮或稀釋。
  處理方法:包括離心、過濾、蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、免疫親和捕獲、蛋白質(zhì)消化和衍生化等多種方法。例如,過濾可以去除樣本中的顆粒,延長色譜柱的使用壽命。
  2、流動相準(zhǔn)備
  溶劑純化:使用的溶劑必須為色譜純,并經(jīng)過0.45μm膜過濾。緩沖鹽等可以是分析純或優(yōu)級純。
  脫氣處理:溶劑及樣品使用前需超聲脫氣30分鐘,以避免氣泡影響分離效果。
  3、系統(tǒng)設(shè)置
  硬件檢查:確保色譜系統(tǒng)的各連接部位密封良好,無泄漏現(xiàn)象。檢查并維護(hù)泵、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器等關(guān)鍵部件。
  系統(tǒng)預(yù)熱:開啟設(shè)備,預(yù)熱并穩(wěn)定系統(tǒng),以確保分析過程中溫度恒定。
  4、方法開發(fā)
  方法選擇:如果已有現(xiàn)成的分析方法,可以直接使用;如果沒有,需要通過篩選各種色譜柱和洗脫液條件來開發(fā)新方法。
  優(yōu)化與驗證:對選定的方法進(jìn)行優(yōu)化,并進(jìn)行穩(wěn)健性測試和方法驗證,確保方法的可靠性和重現(xiàn)性。
  5、數(shù)據(jù)分析
  數(shù)據(jù)采集:通過檢測器測量從色譜柱洗脫的分析物信號,并利用色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行轉(zhuǎn)換,生成色譜圖。
  結(jié)果分析:根據(jù)色譜圖的保留時間、峰面積等參數(shù)進(jìn)行分析和定量,必要時進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線校正。
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